高度灵敏且特异的锁式探针化学技术
目前唯一一种使用锁式探针滚环扩增化学技术的商业化原位分析平台。这种强大的方法能够:
- 高度灵敏地检测广泛的基因表达,包括低表达的转录本。
- 识别较短或高度降解的转录本(即FFPE),且每个基因不需要大量探针。
- 通过可调的灵敏度将高表达的转录本包括在内,且对性能的影响极小。
- 区分高度同源的转录本,如异构体。
工作原理
在Xenium载玻片上制备好组织切片后,后续是化学处理流程,包括探针杂交、连接和酶促扩增。这是一个独特的四步认证过程,对Xenium的高性能至关重要。
第1 & 2步:双重靶点识别和杂交
探针的两臂都必须与它们的靶点稳定杂交。如果只有一条臂杂交,则探针是不稳定的,在杂交后的洗涤过程中会洗掉。锁式探针还包含一段基因特异性的条形码序列,可用来生成每个转录本的独特光学特征。第3步:探针连接
只有当探针的两臂都与靶点稳定杂交且完全匹配时,才会发生近端探针连接。部分结合或错配的探针不会连接,也无法扩增。第4步:滚环扩增(RCA)
只有连接的探针被扩增,这富集了真正的靶点识别事件,抑制了脱靶事件。RCA方法产生了强大而稳定的信号,让单探针检测成为可能。仪器上的检测和解码
在仪器外的化学处理流程完成后,将载玻片上样到Xenium分析仪上进行转录本检测。样本中的扩增产物经过连续几轮的荧光探针杂交、成像和去除。分析生成了每个基因的特定光学特征,从而实现基因靶点的鉴定。最后构建出整张组织切片的转录本空间图谱。
探索数据
- Xenium原位分析平台在运行的同时处理数据,因此在仪器运行后可以直接探索输出结果。注册后可体验个性化的数据演示,亲自探索人类乳腺癌或小鼠大脑的Xenium原位数据集。